Micropropagazione e cappa a flusso laminare

[blackd.712]

wow! ottimi risultati!! continua così!!!

[Luis 22]

Complimentoni! Ottimo lavoro!

[levioloris]

Le prime prove di micropropagazione fotoautotrofa sembrano andar bene. Il terreno senza zuccheri non permette alle muffe di svilupparsi e i piccoli germogli di sarracenia stanno crescendo. Non resta che attendere per valutare velocità di crescita e di divisione cellulare e paragonarla con i risultati ottenuti con la normale micropropagazione.

La cosa si fa interessante, se funziona potrtebbe aprire la strada ad una via di propagazione molto più rapida per le sarre!

Ecco la foto:


Quelli che vedete sono un germoglio di sarra è alcune foglie di dionaea appena messe in coltura,( 2 giorni) per cui non si nota la crescita ( visibile invece nelle piastre più vecchie). Il Terreno è un Ms 1/3 con lo 0,2 % agar (praticamente liquido) senza zucchero , 2 ml/l kinetina e con vermiculite come supporto per le plantule. I contenitori sono forniti di 1,2 o 3 (al fine di testare il migliore) fori da 10 mm con un filtro da 0,3 micron ciascuno per far passare i gas ma non i patogeni contaminanti. Sopra ad essi è applicata una ventola al fine digenerare una corrente d'aria che faciliti gli scambi gassosi tra l'interno e l'esterno. Ciò permette alla Co2 di entrare ed essere fissata dalla pianta. Per ora sembra che un foro sia poco per garantire il corretto supporto energetico , due o tre sembrano avere invece un effetto migliore. Prossimamente testerò un sistema casalingo per arricchire l'atmosfera dei vasi con Co2 esogena.

[Prompt]

Ottimo lavoro e risultati entusiasmanti !

Prompt

[levioloris]

Ancora foto:
1- ecco un espianto fogliare di drosera capensis che, dopo aver formato callo, sta dando alla luce decine di nuovi piccoli germogli. Terreno solito con 0,5 ml/l kinetina:

2-Piccoli germogli di dionaea yellow dipartono dal callo in 0,5 ml/l metatopolina e 0,5 ml/l kinetina rispettivamente.


3- piccoli cephalotus messi in terreno di crescita:

4- dopo due mesi e mezzo i nuovi punti di crersctia formati da questa darli sono ormai incontabili:

5- Ecco i batteri che hanno occupato parte del mio tempo nell'ultimo periodo.
Dopo svariate ricerche bibliografiche e non son venutop a sapere che probabilmente si tratta di pseudomonas fluorescens, PGPR, plant growth promoting rizhobacteria. Batteri in grado di secernere un mix di ormoni vegetali (auxine come l'IAA, IAM e altre, citochinine e gibberelline) e di antibatterici/antimicotici come fenazina, pirrolnitrina e moltissimi altri, che normalmente vivono in simbiosi con le radici delle piante. La cosa interessante è che essendo aerobi (crescono in presenza di o2) in piastra, con concentrazione di o2 molto limitata, si sviluppano in modo controllato senza andare a disturbare la crescita della pianta. Anzi! La crescita in massa delle sarracenie, di cephalotus e di dionaea con questi batteri pigmentati (son quelli in rosso) risulta essere da 3 a 4 volte superiore rispetto alla crescita senza ormoni ( effetto dovuto principalmente alla produzione di auxine in elevate quantità). La scoperta è stata casuale :in una piastra inquinata le piante crescevano in modo smisurato e non riuscivo a capirne il perchè. Dopo qualche mese ho trovato la risposta e ora sto propagando questi batteri per sfruttarli in micropropagazione, avere dei produttori di ormoni e di antibatterici facili da riprodurre risulta economicamente vantaggioso. Spero di riuscire a sviluppare meglio in tesi specialistica questo tipo di simbiosi.


A presto!

[p-97]

Complimenti per gli ottimi risultati!
Paolo

[Aragorn73]

affascinante! non ci capisco nulla ma mi piace.

[nico1989_1]

[Homunculus]

Se non erro il concetto primario di questa procedura sarebbe quello di avere piante " pulite " da qualsiasi batterio muffa o cose che possono provocargli danno, quello che mi domando però è:

Bellissimo il fatto che si riesca ad ottenere piante " pulite " ma prima o poi dovranno andare in terra no? si "contamineranno" ugualmente? e poi... come reagiranno le radici al contatto col terreno? che non sempre può dare il massimo..

non penso che l'esperimento si concentri in una cultura in vitro e basta...
se qualcuno può darmi delucidazioni.. lo ringrazio

[Paolo CPI]

Il principio della micro propagazione prevede la coltura in terreni molto ricchi di sostanze nutritive che purtroppo sono terreni ideali per la proliferazione di muffe e batteri.

Sono quei terreni che nelle piastre Petri permettono il conteggio della carica batterica di acqua, alimenti, aria ecc.ecc.. ... da un singolo batterio (o spora di muffe) nascono in poco tempo colonie di migliaia di migliaia di batteri.

Ecco quindi l'importanza di tenere un ambiente , e un terreno, assolutamente asettico; basterebbe poco per infestare tutto e far morire gli innesti a causa delle variazioni di pH del terreno, della mancanza di elementi nutritivi che l'ammasso batterico avrà causato.

Le plantule che successivamente nasceranno necessiteranno naturalmente di un graduale ambientamento una volta che saranno pronti per essere spostati fuori da quella condizione, ma queste procedure sono relativamente semplici rispetto agli accorgimenti necessari per lavorare dall'inizio alla fine in ambiente sterile.

Quante volte ho pensato di cominciare a sperimentare questa tecnica (6 anni come responsabile C.Q in un laboratorio chimico/microbiologico di un azienda alimentare mi aiuterebbero a qualche cosa ...) ma sinceramente preferisco le mie talee.

Paolo

p.s. Comunque levioloris gran bel lavoro.

[CarloC]

Ottimi risultati!
E' molto interessante l'effetto del presunto Pseudomonas fluorescens

[levioloris]

[valerio]

Questo ulteriore passo in avanti della micropropagazione verso condizioni mixotrofe o addirittura autotrofe è molto interessante! Hai mai pensato di utilizzare il sistema ad immersione temporanea (TIS), per poter utilizzare substrati liquidi senza andare incontro a vitrificazione degli espianti?
Anche la crescita controllata di Pseudomonas fluorescens è una figata!! (perdonami il termine tecnico)
Ma per riprendere il discorso dell'ambientamento: l'hai già provato o per ora ti limiti a studiare varie tecniche di proliferazione e radicazione? Nel primo caso potresti descrivere la procedura che hai usato e che tassi di successo hai ottenuto?
Hai mai provato ad indurre morfogenesi senza passare per il callo (per ridurre il rischio di mutazioni)?
Grazie per condividere questa tua interessante esperienza con noi!

[levioloris]

[valerio]

Ottimo, vedo che hai molto materiale su cui discutere e molti altri spunti per continuare a sperimentare
Per quanto riguarda il TIS, immaginavo che l'automatizzazione potesse essere un problema, ma non avendo esperienza diretta ho chiesto
Attualmente a che velocità di propagazione sei arrivato? intendo dal momento in cui prelevi l'espianto iniziale a quando porti ex vitro le plantule propagate. E quante plantule produci da un singolo espianto?
Ti rinnovo i mei complimenti! Ciao.